Abstrakt
Úvod. Kolitída spôsobená Clostridioides difficile patrí v súčasnosti k najčastejším nozokomiálnym infekciám spojeným s predchádzajúcou antibiotickou liečbou. Za vznik kolitídy sú zodpovedné toxigénne kmene produkujúce toxín A, toxín B, prípadne aj binárny toxín.
Metódy. Z celkového počtu 1181 vzoriek stolíc od pacientov hospitalizovaných v UNLP v Košiciach bol imunochromatografickým testom vyšetrený antigén GDH a toxín A/B. Anaeróbna kultivácia na selektívnom agare bola realizovaná pri 182 vzorkách s pozitivitou GDH alebo GDH a toxínu A/B. K identifikácii C. difficile bola použitá metóda MALDI TOF. Z kolónií bola izolovaná genómová DNA a multiplexnou PCR boli detekované gény pre produkciu toxínov A a B (tcdA a tcdB), binárneho toxínu (cdtA a cdtB) a gén 16S rDNA. Produkty vyšetrovaných génov boli analyzované agarózovou elektroforézou.
Výsledky. Pozitívna kultivácia bola potvrdená pri 153 vzorkách, k zlyhaniu kultivácie došlo pri 29 vzorkách stolice. Multiplexnou PCR bolo otestovaných 153 kmeňov C. difficile. Prítomnosť génov pre všetky tri toxíny súčasne bola potvrdená pri 89 kmeňoch, génov pre toxín A a B súčasne pri 61 kmeňoch, génu pre toxín B pri 1 kmeni. Zhoda medzi výsledkami imunochromatografického testu a multiplexnej PCR bola potvrdená pri 129 vzorkách stolice (84,3%), rozdielne výsledky pri 24 vzorkách (15,7%), pričom až 23 bolo negatívnych v rýchlom teste a pozitívnych v PCR.
Záver. Dvojkroková diagnostika toxigénnych kmeňov C. difficile, ktorá zahŕňa prvotný imunochromatografický test a následnú multiplexnú PCR genómovej DNA po pozitívnej kultivácii C. difficile, výrazne zrýchľuje diagnostiku infekcií C. difficile. Okrem toho PCR testy vďaka vysokej senzitivite a špecificite prispievajú k správnemu určeniu vzoriek stolice vyhodnotených rýchlym testom ako GDH pozitívne a toxín negatívne (tab. 2, obr. 2, lit. 20). Text v PDF www.lekarskyobzor.sk.
KĽÚČOVÉ SLOVÁ: Clostridioides difficile, kolitída, toxíny, PCR, imunochromatografia

Lek Obz 2023, 72 (1): 24-28

Detection of toxigenic strains of Clostridioides difficile

Abstract
Introduction. Colitis caused by Clostridioides difficile is currently one of the most common nosocomial infections associated with previous antibiotic treatment. Toxigenic strains producing toxin A, toxin B, or even a binary toxin are responsible for the development of colitis.
Methods. From the total number of 1181 stool samples of patients hospitalized at the UNLP in Košice, the GDH antigen and toxin A/B were examined by immunochromatographic test. Anaerobic cultivation on selective agar was performed for 182 samples with GDH or GDH and toxin A/B positivity. To identify C. difficile, the MALDI TOF method was used. Genomic DNA was isolated from the colonies and genes for the production of toxins A and B (tcdA and tcdB), binary toxin (cdtA and cdtB) and 16S rDNA gene were detected by multiplex PCR. The products of the investigated genes were analyzed by agarose electrophoresis.
Results. Positive culture was confirmed in 153 samples, culture failure occurred in 29 stool samples. A total of 153 strains of C. difficile were tested by multiplex PCR. The presence of genes for all three toxins simultaneously was confirmed in 89 strains, genes for toxin A and B simultaneously in 61 strains, gene for toxin B in 1 strain. Identical results of the immunochromatographic test and multiplex PCR were found in 129 stool samples (84.3%), discrepant results in 24 samples (15.7%), while up to 23 were negative in the rapid test and positive in PCR.
Conclusion. The two-step diagnosis of toxigenic C. difficile strains, which includes an initial immunochromatographic test and subsequent multiplex PCR of genomic DNA after a positive C. difficile culture, significantly accelerates the diagnosis of C. difficile infections. In addition, PCR tests, thanks to their high sensitivity and specificity, contribute to the correct determination of stool samples evaluated by a rapid test as GDH positive and toxin negative (Tab. 2, Fig. 2, Ref. 20). Text in PDF www.lekarskyobzor.sk.
KEY WORDS: Clostridioides difficile, colitis, toxins, PCR, immunochromatography.
Lek Obz 2023, 72 (1): 24-28

Katarína ČUROVÁ 1, Annamária TOPOROVÁ 1, Nicolas KARDOS 1, Martin NOVOTNÝ 2, Viera LOVAYOVÁ 1, Anna KAMLÁROVÁ 3, Viktória TAKÁČOVÁ 1, Leonard SIEGFRIED 1, Pavol JARČUŠKA 2

1 Ústav lekárskej a klinickej mikrobiológie, Lekárska fakulta Univerzity Pavla Jozefa Šafárika, Košice, prednosta Dr.h.c. prof. MUDr. L. Siegfried, CSc.
2 Klinika infektológie a cestovnej medicíny, Lekárska fakulta Univerzity Pavla Jozefa Šafárika, Košice, prednosta prof. MUDr. P. Jarčuška, PhD.
3 Centrum klinického a predklinického výskumu MEDIPARK, Lekárska fakulta Univerzity Pavla Jozefa Šafárika, Košice, riaditeľ doc. MUDr. J. Fedačko, PhD.

 {aridoc engine="pdfjs" width="600" height="825"}/prezentacie/2023/lekarsky-obzor-2023-01/2023-lekarsky-01-herba-curova-24-28.pdf{/aridoc}